Din Faptele Apostolilor (Noul Testament) aflăm că, la un moment dat, Sfântul Apostol Pavel a ajuns împreună cu Apostolul Barnaba în cetatea Listrei, unde a tămăduit un şchiop din pântecele maicii sale. În urma acestei minuni, mama lui Timotei l-a găzduit în casa sa şi i-a dăruit fiul Apostolului Pavel, ca dar pentru binecuvântarea adusă în cetate.
Mai târziu, după ce Sfântul Apostol şi Evanghelist Ioan a fost alungat de împăratul Domiţian şi exilat în Insula Patmos, Sfântul Apostol Pavel l-a hirotonit episcop în locul acestuia. Pătimirea Sfântului Apostol Timotei este legată de o sărbătoare care se ţinea în cinstea zeilor. Exista obiceiul ca, într-o anume zi din an, închinătorii la idoli să poarte măşti şi să-i omoare pe cei pe care-i întâlneau pe străzi. Socoteau că aşa le aduc jertfă zeilor. În timpul acestui obicei crud, Timotei a ieşit cu îndrăzneală în faţa păgânilor şi L-a mărturisit pe Hristos. Nefiind de acord cu spusele Sfântului Timotei, păgânii l-au bătut până când şi-a dat duhul. Trupul apostolului a fost îngropat cu cinste în locul ce se numea Pion. Mai târziu, din porunca împăratului Constantiu (337-361 d.H.), moaştele Sf. Timotei au fost duse la Constantinopol, de Sfântul Artemie mucenicul şi puse în biserica "Sfinţii Apostoli", alături de moaştele Sf. Apostoli Luca şi Andrei.
